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百日咳桿菌毒素 IgM ELISA：酶聯(lián)法定性及定量測定人血清或血漿中百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）毒素（PT） IgG 抗體水平?；趭A心法固相酶聯(lián)吸附檢測（ELISA）原理。微孔板空中包被抗原，樣品中含有針對抗原特異結(jié)合抗體（人IgG）則可以通過二次酶聯(lián)抗體（E-Ab）檢測到，加入顯色底物，酶解反應(yīng)顯色，顏色深淺與檢測吸附的 IgG 水平成正比，以此通過顏色判斷。
更新時間：2025-01-03
IBL百日咳桿菌IgM檢測試劑
1. 用途
酶聯(lián)法定性及定量測定人血清/血漿中百日咳桿菌毒素(PT) IgG 抗體水平。
百日咳是一種由百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）引起的呼吸道疾病，可以通過空氣傳播傳播。 革蘭氏陰性桿菌會產(chǎn)生一系列生物活性分子，這些化合物或在致病或在針對百日咳的免疫過程中出現(xiàn)，并表現(xiàn)出不同的影響。其中百日咳毒素（pt）、絲狀血細(xì)胞凝集素（fha）和不同脂多糖（lps）等已進(jìn)行了表征研究。
百日咳顯示高傳播率（未接種疫苗的家庭成員的感染率超過 90％）并且可導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，特別是對于幼兒。從1980 年至 1989 年一年內(nèi)的 10749 名患者中，69％被送入醫(yī)院，22％患有肺炎，0.9％患有腦病，0.6％死于肺炎。對于年齡較大的兒童和成人（包括已接種疫苗的人）也通過不明顯支氣管炎或上呼吸道發(fā)炎觀察到感染。無癥狀的病例也很常見。
百日咳疾病或百日咳疫苗免疫后的血清學(xué)反應(yīng)采用凝集試驗(yàn)、沉淀素，補(bǔ)體結(jié)合和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 測定。 對于 ELISA 測定，博德特氏菌抗原（包括毒素，FHA 和 LPS, U/ml）與固相支持物結(jié)合，方法靈敏、易于操作，測定單一血清的血清陽性并通過測定IgM 和 IgA 來判斷近博德特氏菌感染情況。
與其他博德特氏菌屬蛋白相比，百日咳毒素（PT）具有高度特異性。 PT 也是眾多疫苗的組成部分。
基于夾心法固相酶聯(lián)吸附檢測（ELISA）原理。微孔板空中包被抗原，樣品中含有針對抗原特異結(jié)合抗體（人IgG）則可以通過二次酶聯(lián)抗體（E-Ab）檢測到，加入顯色底物，酶解反應(yīng)顯色，顏色深淺與檢測吸附的 IgG 水平成正比，以此通過顏色判斷樣品中IgG 的存在，并通過標(biāo)曲定量測定IgG 的濃度水平。
1. 僅供研究專業(yè)用途使用。
2. 檢測前，完整仔細(xì)閱讀隨試劑盒內(nèi)附的有效版本說明書，確保充分理解全部內(nèi)容。
3. 若試劑盒包裝破損，請于收到試劑盒一周內(nèi)書面聯(lián)系 IBL 或供貨商。不要使用破損的試劑進(jìn)行檢測。
4. 采用同批次同效期試劑進(jìn)行檢測，不同批次的試劑不得混用。不要使用過期試劑。
5. 遵守良好實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范及安全指南，必要時穿戴實(shí)驗(yàn)服、一次性乳膠手套及護(hù)目鏡。
6. 試劑盒中有害成分接觸后可能刺激眼睛和皮膚。詳情見盒內(nèi)材料（MATERIALS SUPPLIED） 及標(biāo)簽。另外，IBL 網(wǎng)上也提供了產(chǎn)品相關(guān)《Material Safety Data Sheets》供下載，或直接尋求 IBL 索取。
7. 化學(xué)品及制備或使用過的試劑必須當(dāng)作有害廢物依照國家生物有害及安全指南或法規(guī)進(jìn)行處理。
8. 清潔人員在處理潛在有害物品時應(yīng)有專業(yè)人士指導(dǎo)。
9. 避免接觸終止液，否則可能引起皮膚過敏及灼傷。
10. 部分試劑含疊氮鈉(NaN3) 防腐劑。若接觸眼睛或皮膚，立即用水沖洗。NaN3 可與鉛和銅管發(fā)生反應(yīng)形成具有爆炸性的疊氮金屬物。因此，處理試劑時，要用大量水沖洗避免疊氮物質(zhì)的積累。
11. 試劑盒中含有人血清或血漿的試劑均經(jīng)過檢測，顯示抗 HIV I/II、HBsAg 及 抗 HCV 均為陰性。盡管如此， 但不能排除這些及其他傳染因子的存在，因此使用及處理時，應(yīng)按潛在生物有害物處理。
5. 保存及穩(wěn)定性
試劑盒常溫條件運(yùn)輸，保存應(yīng)在 2-8 °C。遠(yuǎn)離熱源或陽光照射。樣本及制備試劑的保存與穩(wěn)定性在后面相應(yīng)章節(jié)有述。
未開封的試劑在注明的效期內(nèi)穩(wěn)定。試劑盒初次開封后，微孔板裝在密封袋密封及試劑瓶蓋緊放在 2-8 °C 可以穩(wěn)定保存 3 個月。
遵照常規(guī)靜脈采血注意事項(xiàng)。從采血開始直至檢測時段保持血樣化學(xué)屬性完整性是十分重要的。檢測時避免采用發(fā)生重度溶血、黃疸或嚴(yán)重脂血癥的樣品。外觀渾濁的樣品檢測前要進(jìn)行離心去除顆粒物。 | |||
保存: | 2-8 °C | -20 °C | 遠(yuǎn)離熱源和日光照射 |
穩(wěn)定性: | 7 天 | > 7 天 | 避免反復(fù)凍融 |
7. 試劑盒內(nèi)提供的物品 | |||
數(shù)量 | 標(biāo)識 | 組分 | |||
1 x 12 x 8 | MTP | 微孔板 |
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可拆卸板條，包被有特定抗原。 |
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1 x 15 mL |
ENZCONJ IgG | 酶聯(lián) IgG |
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紅色瓶蓋，即用試劑。內(nèi)含：抗人 IgG 且偶聯(lián)過氧化物酶的抗體 | |||||
含蛋白的緩沖液, 0.01 %甲基異噻唑啉酮, 0.01 % 溴硝基二噁烷 | |||||
及 5 mg/L ProClin。 |
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1 x 4 x 2 mL |
CAL A-D
| 標(biāo)準(zhǔn)品 A-D |
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0; 25; 50; 150 IU/mL. 即用試劑。 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 A = 陰性對照 | 標(biāo)準(zhǔn)品 B = 閾值判斷對照 | ||||
標(biāo)準(zhǔn)品 C = 弱陽性對照 | 標(biāo)準(zhǔn)品 D = 陽性對照 | ||||
標(biāo)準(zhǔn)品按單位 (IU) WHO 標(biāo)準(zhǔn) 06/140 進(jìn)行過校正 | |||||
內(nèi)含： 抗百日咳毒素(PT)的 IgG 抗體及 PBS 稀釋過的人血清、 | |||||
0.01 %甲基異噻唑啉酮及 0.01 %溴硝基二噁烷。 | |||||
1 x 60 mL | DILBUF | 稀釋緩沖液 |
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即用試劑。內(nèi)含： PBS 緩沖液、BSA, < 0.1 % NaN3。 | |||||
1 x 60 mL | WASHBUF |
| CONC | 濃縮洗液 (10x) |
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內(nèi)含: PBS 緩沖液、吐溫 20。 |
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1 x 15 mL | TMB SUBS | TMB 底物液 |
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即用試劑，內(nèi)含四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。 | |||||
1 x 15 mL | TMB STOP | TMB 終止液 |
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即用試劑， 0.5 M H2SO4. |
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2 x | FOIL | 粘性鋁箔 |
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供孵育時蓋住微孔板使用。 |
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1 x | BAG | 塑料袋 |
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密封袋，用于未使用板條的干燥保存。 | |||||
1. 微量移液器 (Eppendorf 多通道移液器或類似產(chǎn)品, < 3% CV)，量程： 5、 50、100、500 µL
2. 校正過的檢測裝置
3. 用于樣品稀釋的管子 (1 mL)
4. 8 通道微量移液器，及試劑儲槽
5. 洗瓶、自動或半自動洗板機(jī)
6. 酶標(biāo)儀，可以讀取 450 nm (校正波長 600-650 nm) 的吸光值
7. 雙蒸水或去離子水
8. 吸水紙巾、移液槍頭、計(jì)時器
1. 任何不當(dāng)處理樣品或修改測試程序都可能影響結(jié)果。 要求的移液量、孵育時間、溫度和預(yù)處理步驟必須嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。 僅使用經(jīng)過校準(zhǔn)的移液器和檢測設(shè)備。
2. 測試開始后，所有步驟都應(yīng)該不間斷地完成。 確保在適當(dāng)?shù)臅r間準(zhǔn)備好所需的試劑、材料和設(shè)備。 允許所有試劑和樣品達(dá)到室溫（18-25oC），并在使用前輕輕旋轉(zhuǎn)每瓶液體試劑和樣品。 混合試劑不要起泡。
3. 避免污染試劑，移液器和孔/管。 為每個組份和樣品移取時使用新的一次性塑料移液器吸頭。 瓶蓋不要互換。未使用的試劑瓶要始終蓋上。 不要使用用過的板孔/試管或試劑。
4. 使用移液方案驗(yàn)證合適的板布局。
IBL百日咳桿菌IgM檢測試劑
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